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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞

簡要描述:Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞 DH5α感受態(tài)細胞
DH5α菌株是實驗室常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內(nèi)切酶(endA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性。

  • 產(chǎn)品型號:DH5α
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-19
  • 訪  問  量:678

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG001-100
規(guī)格ABG001-100(100支100ul)供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

基因型:

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1

簡要說明:

DH5α菌株是實驗室常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內(nèi)切酶(endA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α菌株的缺點是生長緩慢,37℃需培12-14小時才能看見克隆;如需加快試驗速度,請選用TG1,Mach1-T1,XL10-Gold等生長速度快的感受態(tài)細胞。High5TM系列DH5α感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率約1×109cfu/μg。

操作說明:

1. DH5α感受態(tài)細胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手攪打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少17h。

注意事項:

1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化,融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒,否則會影響轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。




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